应用背景

减毒疫苗（或称减毒活疫苗，LAV）是一种通过降低病原体的毒力但仍保持其活力而产生的疫苗，减毒疫苗可以刺激强烈而有效的持久免疫反应。减毒作用是吸收感染因子并改变它，使其变得无害或毒性降低，鼓励身体产生抗体和记忆免疫细胞，以应对疫苗所针对的特定病原体。电镜下轮状病毒呈二十面对称球形颗粒,三层衣壳(外壳、内壳、核壳),外型似车轮，故命名为“轮状病毒”ERotavirus)。1973年由澳大利亚科学家Bishop首次发现，人轮状病毒是婴幼儿腹泻最重要的病毒病原。轮状病毒疫苗是预防轮状病毒肠炎的疫苗，轮状病毒疫苗并非灭活疫苗，而是减毒活疫苗，轮状病毒疫苗属于减毒的重组活疫苗。

重组蛋白

20世纪60年代以后，用细胞作为病毒培养基质制备的狂犬病疫苗逐渐取代了神经组织和禽胚疫苗，其中细胞培养基质主要有动物细胞(包括原代地鼠肾细胞、鸡胚细胞及传代Vero细胞)和人二倍体细胞。轮状病毒属呼肠孤病毒科，病毒基因组为含11节段的双链RNA。主要结构蛋白为(外壳VP4和VP7,内壳VP6)。人和动物轮状病毒的VP6具有相同的抗原性，且动物毒株比人RV毒株易于在组织培养中生长，且对人天然减毒。这是研究轮状病毒减毒活疫苗的研制理论基础。工业上常常用哺乳动物细胞作为病毒培养基质，已注册轮状病毒疫苗有减毒羊轮状病毒株疫苗(兰州生物制品研究所，中国)、减毒人轮状病毒株疫苗(GSK)、基因重配5价牛株轮状病毒疫苗(Merk)。

应用方案

通过高压细胞破碎仪使物料在柱塞作用下进入可调节压力大小的阀组中经过特定宽度的限流缝隙均质区在均质阀内产生三种效应:空穴效应、撞击效应、剪切效应的机械作用力从而打破细胞壁的束缚，把蛋白质从组织或细胞中释放出来尽可能保持原来的天然状态，不丧失活性，达到高效率破碎细胞的效果。即使用高压匀浆破碎法采用高压细胞破碎法，在细胞内产生的压力效应，从而能够有效地提取出蛋白质，且处理量大、破碎速度较快。这是一种机械处理细胞，物理抽提方法。

解决方案-破壁

首先将病原细菌进行病原菌培养形成菌体发酵液或将病毒放入细胞培养基中培养形成细胞培养液，进行悬浮培养合成抗原物质。接着通过沉降、离心、过滤等方式进行固液分离，对生物工程产物进行预处理。然后通过高压细胞破碎仪对细胞进行破碎，释放胞内产物得到细胞提取液，初步提取目标产物。最后收集纯化制备抗原。

解决方案-纯化

在生产轮状病毒疫苗的时候，需要大量培养的细胞，让它们染上病原体，经过培养，繁殖出大量病毒，灭活以后做为抗原，注射到人体里。在这个过程中，需要用到Minnebio™ 超活核酸酶Ultra-active Nuclease。细胞在培养过程中，残留下大量DNA是非常危险的，可以渗透到人的细胞里造成各种各样的遗传疾病，像是畸形，癌症等。因此在疫苗的生产过程中必须去除残留的DNA，各国对此都有严格的规定，Minnebio™ 超活核酸酶Ultra-active Nuclease是首选核酸酶，因为它广谱，高效。它比传统使用的核酸酶DNAase活性高10倍左右，速度快15倍左右。

PhD优势

高压均质法是工业上常用的破碎细胞的方法之一，属于物理破碎细胞的方法。轮状病毒疫苗原液生产使用均质机处理轮状病毒收获液破碎细胞释放病毒的工艺，该设备在病毒感染细胞收获后，用于处理感染细胞，使之破碎释放病毒，用于后续工艺生产。工业上常常用哺乳动物细胞作为病毒培养基质制备轮状病毒疫苗，常见压力在0～1000bar左右。

◆破壁能力：高压设计，轻松上压；均质效率高，工艺稳定；稳定的破碎能力，更高的胞内物提取；纯机械破碎，无化学污染；可放大工业化生产工艺设备

◆控温效果：独特温控设计，内置和外置双向控温，确保均质过程及出料温度可控。

◆活性保障：循环的控温系统，蛋白活性不失活，细胞破碎后，活性保值高达99%                                                                 

◆无菌保障：金属结构连接，没有O型圈或垫片，无死角设计；在线排空结构设计；所有机型均可实现在线清洗（CIP）、循环清洗、拆装清洗、在位灭菌（SIP）